Sanger-féle módszer elve

Source of the photo
http://www.scq.ubc.ca/genome-projects-uncovering-the-blueprints-of-biology/
Author of the description
KÖRINFO

1.: A szekvenálandó egy szálú DNS fragmentumon primer segítségével kijelöljük a szekvenálandó szakaszt.

2.: A reakcióelegyhez a normál szintézishez szükséges pufferen, DNS-polimeráz enzimen és dezoxi-nukleotidokon kívül didezoxi-nukleotidokat is adunk, melyek beépülésükkel leállítják a DNS szintézisét. Mind a négy didezoxi-nukleotid más-más színű fluoreszcens anyaggal van megjelölve, ez képezi a terminálisan beépülő bázis azonosítását.

3. Szintézisek és denaturálási eljárások egymás utáni elvégzése.

4. Két dimenziós gél-elektroforézis elvégzése (az elektroforetizált molekulákat először y, majd x irányban is futtatják a gélen).

5. A bázissorend detektálása manuálisan.